ITRAQ/TMT標記定量蛋白質(zhì)組學(xué)

服務(wù)介紹：

　　蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)指的是大規(guī)模、高通量地研究一個細胞、組織或物種中表達的全套蛋白質(zhì)的學(xué)科。近十年來，質(zhì)譜技術(shù)的飛速發(fā)展大大推動了的蛋白質(zhì)組學(xué)的進步，基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)已經(jīng)成為蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域技術(shù)手段。通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可以對生物樣本中的蛋白質(zhì)、翻譯后修飾位點(如磷酸化)進行大規(guī)模地鑒定或定量，進而從高通量的數(shù)據(jù)分析中挖掘有價值的信息和規(guī)律，為功能機制的探究提供線索和基礎(chǔ)。2003年，人類基因組計劃(HGP)完成精細圖的繪制后，同年，人類蛋白質(zhì)組學(xué)計劃(HPP)隨即開展起來，反映了科研領(lǐng)域?qū)Φ鞍踪|(zhì)組學(xué)的重視。經(jīng)過十年時間，多家單位的共同努力下，人類蛋白質(zhì)組草圖也于2014年在Nature雜志公布了。

iTRAQ技術(shù)是美國應(yīng)用生物系統(tǒng)(AB SCIEX)公司與2004年推出的一種全新的體外同重同位素標記的相對與絕對蛋白組定量技術(shù)。該同位素標記法利用多種同位素試劑標記蛋白多肽N末端和賴氨酸側(cè)鏈基團，經(jīng)高精度質(zhì)譜儀串聯(lián)分析，可同時比較多達8種樣品之間的蛋白表達量，能夠高通量地尋找不同蛋白質(zhì)組的差異蛋白并且準確進行相對或絕對定量，是近年來定量蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用廣泛的高通量篩選技術(shù)。

　　實驗流程：

　　蛋白提取—蛋白酶解—肽段標記富集—高分辨質(zhì)譜檢測采集數(shù)據(jù)—數(shù)據(jù)庫檢索—數(shù)據(jù)整理分析

　　送樣運輸要求：

　　1、蛋白樣本

　　①蛋白量大于100ug，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　　②建議測定蛋白濃度后，液氮速凍，避免蛋白降解，另外需要告知蛋白溶液的緩沖液成分和濃度，方便實驗室收到后進行后續(xù)處理。

　　③膠條、膠點樣本不建議進行定量蛋白質(zhì)組學(xué)。

　　2、細胞樣本

　　①細胞量1x10⁷個，收集細胞沉淀，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　　②收集時，用預(yù)冷PBS緩沖液清洗三次，去除培養(yǎng)基成分，然后離心去除上清保存。

　　3、血清樣本

　　①樣本量500uL，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　　②樣本應(yīng)盡量避免溶血。

　　4、血漿樣本

　　①樣本量500uL，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　　②樣本應(yīng)盡量避免溶血。

　　5、尿液樣本

　　①樣本量2mL，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　　②樣品應(yīng)盡量避免帶入糞便殘渣。

　　6、動物組織樣本

　　①樣本量300mg，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　　②收集時，用預(yù)冷PBS緩沖液沖洗表面血液，并用濾紙吸干多余水分，避免凍存時結(jié)冰。

　　③固定液浸泡過的樣本無法進行檢測。

　　7、植物組織樣本

　　①樣本量500mg，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　　②收集時，用預(yù)冷PBS緩沖液沖洗表面泥沙，并用濾紙吸干多余水分，避免凍存時結(jié)冰。

　　③固定液浸泡過的樣本無法進行檢測。

　　8、微生物樣本

　　①樣本量干重200mg，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　　②收集時，用預(yù)冷PBS緩沖液清洗三次，去除培養(yǎng)基成分，然后離心去除上清保存。

ITRAQ/TMT標記定量蛋白質(zhì)組學(xué)