ELISA試劑盒技術(shù)咨詢問題

靈 敏 度

試劑盒能檢測到待測抗原的zui低濃度。（zui小檢出量）

檢 測 下 限

試劑盒使用該樣本的處理方法，能檢測到樣本中待測藥物的zui低含量                      （檢測下限=靈敏度*稀釋倍數(shù)）

交 叉 率

指在同一測定方法中有兩種以上的不同抗原對一種抗體同樣特異性結(jié)合

回  收  率

（添加管濃度-空白管濃度）/添加量*100%

添加范圍：檢測下限以上~曲線zui大濃度

添加濃度：第三標準~第四標準濃度之間

單位換算：高標準100ppb添加10ul等于添加1ppb

樣  本  處  理

采取樣本：去除脂肪的勻漿樣本

樣本解凍：嚴禁直接放入水中解凍（由于多個樣本和水的原因，可能造成假陽性），可室溫放置或密封后放入水中解凍

試劑的配制，加入有機溶液的量，震蕩時間嚴格按照說明書操作

離心：zui終分離效果好，需要相層清澈透明

取相：靠壁輕吸所需相層，嚴禁吸到其它相層（其它相層可造成假陽性）

凈化：加入正己烷凈化，復(fù)溶液提取，充分混勻

酶 免 步 驟

加樣點板

洗板

酶標儀的使用（450nm）

試劑盒注意事項

詳見說明書

word天！zui全的ELISA試劑盒技術(shù)問題總結(jié)原來在這里！

常見問題處理

出現(xiàn)問題

出現(xiàn)問題的原因

解決辦法

    曲           線

OD值不正常

試劑盒未回溫

試劑盒回溫到25℃

溫度控制不好

控制正確溫度

孵育時間不準確

控制孵育時間

洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、

洗滌次數(shù)增加

洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干

陽光直射，對著風直接吹

避風避光

酶標儀的波長錯誤

酶標儀的波長450nm

抗體的稀釋錯誤

正確的稀釋抗體

水質(zhì)問題

用娃哈哈礦泉水代替

白   板

洗滌液配制錯誤

正確的配制洗滌液

少加液體（抗體、酶標記物、A液、B液）

正確的步驟加液體

錯加液體

無 梯 度

標準品也污染

換標準品點板

OD值不正常

控制溫度時間在做一次

人為點板

/

線 性 不 好

OD值不正常

控制溫度時間在做一次

人為點板

/

回   收    率

空白管陽性高

樣本本身就是陽性樣本

換陰性樣本做回收率

空白管在實驗中被污染

實驗中防止交叉污染

水質(zhì)原因

用娃哈哈礦泉水代替

偏  高

添加量不準確

的添加量

添加濃度不適合

添加合適的濃度

取液吹干量多

準確的取液吹干

取到其它相層液體

取需用相吹干

復(fù)溶液未稀釋或加入量少

正確的稀釋復(fù)溶液

偏  低

添加量不準確

的添加量

添加濃度不適合

添加合適的濃度

取液吹干量少

準確的取液吹干

復(fù)溶液稀釋錯誤或加入量多

正確的稀釋復(fù)溶液

出現(xiàn)問題

出現(xiàn)問題的原因

解決辦法

假陰、陽性

水質(zhì)原因

點復(fù)溶液驗證

用娃哈哈礦泉水代替

實驗操作原因

吸取到其它相吹干

準確的取液吹干

離心不*

延長離心時間

樣本的污染

更換樣本

乳化未處理*

溫?。?0℃）處理乳化現(xiàn)象

儀器試劑原因

離心管未清洗干凈

正確的洗滌器具

有機溶劑的影響

做試劑空白看影響結(jié)果

衍生化試劑原因（長時間衍生化試劑變質(zhì)）

更換衍生化試劑

與曲線好壞相關(guān)

保證曲線的正常

金標檢測（T）線顏色較淺

尿液pH偏堿性

用0.01M HCl調(diào)節(jié)尿液pH值到7.0左右。

尿樣滴加過多

重新測定，尿樣按照說明書，控制在2滴

尿液過于混濁

將尿液離心后，取上清液重新測定

金標質(zhì)控（C）線不出現(xiàn)

檢測卡由于高溫、受潮等原因失效

尿樣需要重新檢測。

過了有效期失效。

該批號的金標應(yīng)丟棄處理，尿液需要重新檢測

操作過程中檢測卡沒有平放，導(dǎo)致液體樣品直接沖過檢測區(qū)

尿樣需要重新檢測，且檢測卡平放于桌面上再加樣。

尿液樣品中含有較高的抑制或者干擾抗原抗體反應(yīng)的物質(zhì)（比如明礬、小蘇打、氧化劑、肌酐等）

該尿液的檢測結(jié)果無效

金標卡上在除了T和C線之外的其他地方出線

金標卡上的劃痕；膠體金在跑板過程中沒有*跑干凈而在卡上的痕跡；

該檢測卡結(jié)果不可信，尿液需要重新檢測。

實驗重復(fù)性不好

操作人員的不一致，取樣的不一致，樣本數(shù)量的多少，加樣時間的長短，洗滌條件不一致，加樣量不一致

盡量保持的實驗一致性

分析軟件的使用

不能設(shè)置和保存

正確的設(shè)置和保存

如何判斷曲線的好壞和分析結(jié)果

正確的判斷曲線的好壞和分析結(jié)果