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ABTS二銨鹽是過氧化物酶的底物,常用于ELISA實驗

更新時間:2022-06-09      瀏覽次數:9554

ABTS二銨鹽是過氧化物酶的底物,常用于ELISA實驗


ABTS作為底物在過氧化物酶的作用下產生可溶的綠色螯合物,該綠色產物吸收峰為405nm。該反應可用1%SDS終止。相對于OPD或TMB底物,ABTS的顯色背景低很多。


二氯熒光黃指示劑-20220411.jpg


ABTS二銨鹽也可用于總抗氧化能力檢測,ABTS作為顯色劑,檢測血漿、血清、唾液、尿液、細胞/組織裂解液、植物提取液、或各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。


使用方法


第1步:7.4 mmol/L ABTS 0.2ml 和 2.6 mmol/L K2S2O8 0.2ml等比例混合,在室溫避光條件下室溫放置12小時。


第2步:用pH 7.4磷酸鹽緩沖液或無水乙醇、甲醇稀釋上述配制的溶液45倍至A734nm=0.7± 0.02。


第3步:取0.2ml 無水乙醇、0.2ml待測樣品,分別加入第2步配好的ABTS工作液0.8ml,渦旋輕微震蕩混勻10s,室溫靜止6min。對照無水乙醇A734nm檢測結果記為A0 ,樣品組記為A ,清除率=(A0-A)/A0*100%


標準曲線:稱取12.5 Trolox,定容至20ml,稀釋得到25~2500 umol/L濃度作標準曲線。


相關溶液配制:


1,ABTS儲存液(7.4mmol/L,0.4ml):取ABTS 3mg,加蒸餾水0.735ml。(分子量:548.68)。


2,K2S2O8儲存液(2.6mmol/L,1.43ml):取K2S2O8 1mg,加蒸餾水1.43ml。(分子量:270.32)。


3,Trolox標準液(0.3mmol/L,9.6ml,0.1042mg/ml):取Trolox 1mg,加蒸餾水9.6ml。(分子量:346.0)。