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南京信帆-兔抗卵清蛋白(抗血清)抗原的制備流程

更新時(shí)間:2020-06-05      瀏覽次數(shù):1444

南京信帆-兔抗卵清蛋白(抗血清)抗原的制備流程

 

抗血清copy也稱高免血清,指將處于高度免疫狀態(tài)下的動(dòng)物(自然感染某病原體發(fā)病后耐過而恢復(fù)健康的動(dòng)物,或健康動(dòng)bai物經(jīng)連續(xù)幾次接種疫苗而體內(nèi)產(chǎn)生高滴度抗體的動(dòng)物)進(jìn)行采血后分離到的含抗體滴度較高的血清。這類抗血清可du用于特異性動(dòng)物疫病的緊急預(yù)防和緊急治療,由于其直接增加機(jī)體內(nèi)的抗體含量,故產(chǎn)生的防治zhi效果快而顯著。但因其不能刺激機(jī)體繼續(xù)產(chǎn)生抗體,故dao在體內(nèi)維持時(shí)間不長,免疫期較短,但對發(fā)病早期的動(dòng)物療效顯著。

 

抗原制備

1)抗原稀釋:用滅菌生理鹽水將抗原稀釋為2mg/ml,于免疫前一天加入溶液,使每毫升抗原溶液含青霉素1000 UI,鏈霉素1000 UI,放4℃過夜(一般可不加青、鏈霉素)次日取出,與佐劑混合制成乳劑后用于動(dòng)物免疫。

 

佐劑和抗原乳劑的配制:佐劑的配制:福氏*佐劑(Freund’s complete adjuvant),各實(shí)驗(yàn)室的配方不盡相同


3、免疫途徑,劑量和免疫周期:抗原注射途徑可根據(jù)不同抗原及試驗(yàn)要求,選用皮內(nèi)、皮下、肌肉、靜脈或淋巴結(jié)內(nèi)等不同途徑注入抗原進(jìn)行免疫。一般常采用背部、足掌·耳后等處皮內(nèi)或皮下多點(diǎn)注射。初次免疫與第二次免疫的間隔時(shí)間多為2~4周。

 

試血,測定抗體效價(jià):一般在第三次免疫后7~10天即可于兔耳靜脈或小鼠尾尖取少量血,分離出血清之后進(jìn)行試血。


放血:經(jīng)效價(jià)檢查合格后即可放血。放血前動(dòng)物應(yīng)停食12 h,以減少血清中的脂肪含量。如擬保留該免疫動(dòng)物,可直接由心臟取血,或切開耳緣靜脈滴血或心臟穿刺取血。取血后由靜脈緩緩注入等量5%葡萄溶液以補(bǔ)足失血量。


分離血清:必須在無菌條件下進(jìn)行,待收集于平皿或三角瓶內(nèi)的血液凝固之后,用無菌滴管在無菌環(huán)境(例如超凈工作臺)中把xue塊與瓶壁剝離后,放入37℃,1~2h取出后放入4℃過夜,使血清充分析出(不能冰凍,否則產(chǎn)生溶血),經(jīng)離心沉淀分出血清,放進(jìn)低溫冰箱保存。使用前必須經(jīng)過簽定合格后再分裝保存?zhèn)溆谩?/p>


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