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髓過氧化物酶mpo試劑盒的檢測原理!

更新時間:2018-03-13      瀏覽次數:1250

 髓過氧化物酶mpo試劑盒的檢測原理!
 

中性白細胞中存在有髓過氧化物酶 ,每個細胞中所含的酶的量是一定的,約占細胞干重的 5%,該酶具有使過氧化氫還原的能力,利用這一特點可以分析酶的活力,并定量測定中性白細胞的數目。

其原理如下:MPO+H2O2→復合物;復合物+AH2(供氫體) →H2O+MPO+A 產物通過供氫體鄰連茴香胺供氫后生物試劑黃色化合物,在 460nm 處通過比色測定 A 產物的生成量,從而推算出 MPO 的活力以及 H2O2 減少的量和白細胞的數目

一.試劑組成與配制:(100T/48 樣)


試劑一:緩沖貯備液 35ml X 1 瓶,4℃保存 6 個月緩沖應用液的配制: 貯備液:雙蒸水=1:9,按需要量配制,4℃保存 1 個月。


試劑二: 粉劑 X2 支,4℃保存 6 個月。臨用時每支加緩沖應用液 60ml 溶解,可以 37℃加熱溶解,4℃保存 2 周。


【注】若您所需測的是組織樣本,并且除髓過氧化物酶之外,還需測其他項目時,此時每支試劑二粉劑需配成濃縮一倍的溶液,即每支試劑二粉劑加到緩沖應用液 30ml 中。


試劑三: 粉劑 X3 支,溶劑 6mlX3 支,4℃保存 6 個月。用時 1 支粉劑倒入 1 支溶劑中溶解,提前一天配制,充分溶解后 4℃保存 2 周。

 髓過氧化物酶mpo試劑盒的檢測原理!


試劑四:溶液 24mlX1 瓶,天冷時會凝固。用前放入 37℃以上的水中搖晃使其溶解至透明后方可應用,室溫保存 6 個月。


試劑五:粉劑 X2 支,4℃保存 6 個月。


試劑六:溶液 0.5mlX1 支,4℃保存 6 個月。


顯色劑的配制:臨用時將試劑五粉劑 1 支加到 100ml 緩沖應用液中,充分搖勻,待粉劑*溶解后再加入試劑六 0.1ml,充分混勻,配制好的顯色劑 4℃避光保存。


試劑七:溶液 6ml X1 支,4℃保存 6 個月。


二.組織樣本的 MPO 測定


(一)、樣本前處理

1.準確稱取組織重量,以配制好的試劑二溶液為勻漿介質,按重量體積比為 1:19 加勻漿介質

制備成 5%的組織勻漿,不需要進行離心。


【注】:若您除做髓過氧化物酶之外,還需要測其他指標時,則組織勻漿制備要按下面方法:


1.試劑二配制時要濃縮一倍,即每支試劑二粉劑加到 30ml 緩沖應用液中;先用生理鹽水為勻漿介質按實驗方法學制成濃縮一倍的勻漿,即 10%勻漿(腦組織制備成 20%勻漿),不要離心,取出部分濃縮一倍勻漿按 1:1 比例加入濃縮一倍的試劑二溶液,混勻后再進行測定。


2.取 5%組織勻漿 0.9ml 加 3 號試劑 0.1ml,(如果組織勻漿量不夠,可以按 9:1 的比例減少組織勻漿及 3 號試劑的用量),充分混勻后 37℃水浴 15 分鐘,取出后待測。

 髓過氧化物酶mpo試劑盒的檢測原理!