硝酸還原酶試劑盒樣本的前處理了解一下
 

硝酸還原酶是一種氧化還原酶，可催化硝酸離子還原成亞硝酸離子的反應。

硝酸還原酶位于細胞質(zhì)內(nèi)或細胞膜外，在硝酸鹽還原途徑中是限速因子，通過 NADH和 NADPH 其中之一或兩者( 雙功能) 提供兩個電子催化反應，使硝酸鹽轉(zhuǎn)換成亞硝酸鹽。

測定意義

NR EC 1.7.1.3 廣泛存在于植物中， 是植物 硝態(tài) 氮 轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮的關(guān)鍵酶，也是誘導酶，對作物的產(chǎn)量和品質(zhì)有影響。

測定原理

NR催化 硝酸鹽還原為亞硝酸鹽 NO3ˉ +NADH+H → NO2ˉ +NAD +H 2 O 產(chǎn)生的亞硝酸鹽 能夠 在酸性條件下 與對 氨基苯磺酸及 α 萘胺 定量生成紅色偶氮化合物 生成的紅色偶氮化合物在 540 nm 有大吸收峰，可用分光光度法測定。


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樣品測定的前處理

組織的前處理：

（1 取適量誘導劑于燒杯中，將新鮮標本洗凈，濾紙吸干，放入誘導劑應用液中（淹沒即可），浸泡 2h ，取出樣本，濾紙吸干后20 冷凍 30min ，取出樣本，濾紙吸干。 （一般不要誘導處理，預測定結(jié)果沒有活性則需要 誘導處理）

（2 按照組織質(zhì)量（ g ））：提取液體積 ( 為 1 5~10 的比例（建議 稱取約 0.1g 組織，加入

1mL 提取液 進行冰浴勻漿。 8 000g 4 離心 10min ，取上清，置冰上待測。

細菌或培養(yǎng)細胞的前處理：

先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10 4 個）：提取液體積（ mL ）為 500~1000 1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20 ％或 200W ，超聲 3s ，間隔 10s ，重復 30 次）； 8000g 4 離心10min ，取上清，置冰上待測。


植物體內(nèi)的硝酸鹽在硝酸還原酶和亞硝酸還原酶的作用下，通過代謝途徑轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽，再轉(zhuǎn)化為銨，后被用于蛋白質(zhì)的合成。土壤中硝酸鹽含量過高時，植物體內(nèi)的硝酸還原酶和亞硝酸還原酶不發(fā)揮作用，從而導致硝酸鹽和亞硝酸鹽的積累。亞硝酸鹽是在葉片褐變和莖形成過程中產(chǎn)生的。亞硝酸鹽是亞硝基化劑的前體，亞硝基化劑與煙草生物堿反應生成煙草*亞硝胺(N-亞硝胺)。
 

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